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细胞培养的正确方法

2022-04-29

  细胞培养工程是生物工程的一个重要组成部分,工业生产上通过“细胞培养”来加工或制作产品。为实现工业化生产,最大化提高生产效率,就必须解决细胞培养方式是否是正确的问题。

  因为通过细胞培养技术生产的产品对制造工艺非常敏感,所以细胞培养过程完全一样,不同批次的产品质量还是会有变化。为最大限度得减少各批次间的不一致,需要定期取样测定或进行连续测量,让这些参数保持在设定值或范围区间内。除此之外,采用正规的培养细胞的规范才可以更加高效准确得培养出好的细胞产品。

  准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超净工作台的清洁与消毒,培养箱及其他仪器的检查与调试。

 

  在培养细胞的过程中,接种细胞是十分重要的开始过程,因为这一步会直接影响到你接下来的培养细胞的过程。在细胞转移时,吹打细胞液使其均匀重悬,确保接种细胞数量一致,但要避免过度吹打,以免产生剪切力。

培养基中气泡对细胞贴壁的影响

  在培养细胞时,普通手动移液器加细胞液过程可能会由于操作速度过快造成气泡产生,气泡会破坏细胞附着,导致细胞培育的效果不佳,产生误差,所以在移液时需要进行练习,以避免气泡生成,同时注意消除吸头内的空气,最好是使用外置活塞式分液器,因为外置活塞式分液器可以在不产生气泡的情况下转移易气泡液体。

 

  正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次,观察的内容包括细胞是否生长良好,形态是否正常,有无污染,细胞进入培养器皿后,立即放入培养箱中,使细胞尽早进入生长状态。

超净工作台内的无菌工作规范

  细胞培养是一项十分严谨且专业的实验过程,超净工作台原理是在特定的空间内,室内空气经预过滤器初滤,由小型离心风机压入静压箱,再经空气高效过滤器二级过滤,从空气高效过滤器出风面吹出的洁净气流具有一定的、均匀的断面风速,可以排除工作区原来的空气,将尘埃颗粒和生物颗粒带走,以形成无菌的高洁净的工作环境。所以实验一般在超净无菌工作台上进行,所以超净工作台一定要保持整洁卫生规范。超净工作台上应该采用从左到右,从洁净的实验空间到放置实验废品的脏污空间摆放。

 

 

  如果在实验过程中随意摆放过多实验器材,容易阻挡超净工作台的气道流通,形成湍流,容易使污染物进入容器,让细胞受到污染。

正确管理CO₂培养箱

 

  CO₂培养箱是存储细胞和培养细胞生长的实验器材,实验人员在实验过程中难以避免需要摆放细胞培养皿进CO₂培养箱,这个时候就需要注意,实验人员应该避免频繁的开关CO₂培养箱,让箱内的实验环境受到影响无法及时恢复,导致细胞培养生长受到干扰。同时,在CO₂培养箱内摆放的样品需要注意规范好摆放的位置并做好正确的标记,做到培养箱门快开快关,一般的实验室培养箱往往多人合用,建议合用的培养箱配置内外门,最大化程度减少开关门对培养箱环境的影响,避免实验样品混淆和交叉污染的风险。

CO₂培养箱的常规维护和消毒

  CO₂培养箱需要保持湿润的环境,所以需要定期(1-2周)将盛液盘整体移出,将残留的水清空,用70%的酒精或异丙醇溶液擦拭消毒,待干燥后添加无菌蒸馏水,再放回培养箱内。

 

  CO₂培养箱一般需要1个月进行一次消毒清理,实验人员需要按规范拆除培养箱的搁板、搁架及水盘,将酒精喷洒于布上,再进行腔体的清洁,培养箱内尽量避免死角的存在,擦拭腔体内每个位置,再将移除的配件擦拭清洁后,安装到位。

 

  目前自动化设备已代替人工复杂操作,可通过运行高温消毒程序,有效避免污染发生。

  细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用,细胞培养过程一定要准确严谨且按照规范操作。

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